Het vervolg van het succesvolle Assassin's Creed, dat in 2007 uitkwam. Assassin's Creed II speelt zich af in Italië tijdens de renaissance, eind 15e en begin 16e eeuw. Desmond zal via de animus weer in de voetstappen treden van één van zijn voorvaders: Ezio Auditore da Firenze. Deze edelman komt uit een rijke familie, maar zint op wraak na een brute moord op zijn vader en broers. Ondertussen moet hij ook nog zorgen voor zijn moeder en zus. Het blijkt dat zijn vader in het geheim een assassin was, Ezio vervolgt deze beroepskeuze dan ook.

Schouwspel van dit avontuur zijn twee bekende Italiaanse steden, Florence en Venetië. Deze zijn waarheidsgetrouw nagemaakt en je zal bekende landmarks als de de Basiliek van St. Mark, Grand Canal en Ponte Vecchio tegenkomen. Net als in deel één ligt er tussen deze twee steden het platteland, van Toscane, waar ter paard doorheen gereden kan worden.

Een groot minpunt uit Assassin's Creed was dat het naar verloop van tijd erg monotoon werd. Dit is in deel twee aangepakt. De missiestructuur lijkt meer op die van bijvoorbeeld GTA, met veel verschillende doelen en je kunt van meer mensen missies aannemen. Leuk is dat deze missie-gevers bekende Italianen zijn. Zo kom je onder anderen genie Leonardo da Vinci tegen.

Assassin's Creed verscheen in november 2009 voor de Xbox360 en PlayStation 3. De PC-verscie volgde in maart 2010.